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解讀:血清融化三步法背后的秘密原理!

更新時(shí)間:2017-08-21  |  點(diǎn)擊率:2202

   提起細(xì)胞培養(yǎng)中,牛血清的融化,大家首先想到的就是4℃過夜法。

  今天小威把上流行多年的『血清融化三步法』介紹給大家,讓你知道怎樣讓你的血清,通過合適的融化,事半功倍!

  與4℃過夜法相比

  三步法為什么對血清更好呢?

  重點(diǎn)有二!

  其一:關(guān)系到沉淀出現(xiàn)的幾率!

  記得嗎?血清在融化過程中,瓶子里冰塊的底部你會看見亮亮的蛋白絲在下沉,如同蜂蜜溶于水時(shí)的亮線,這就是血清中大量的蛋白在快速融化,而水的熔點(diǎn)高于蛋白,融化的速度是比蛋白慢的。(回想一下冰淇淋和大棒冰的區(qū)別,你懂得?。?/p>

  試想,如果采用4℃過夜的方法,1瓶500毫升的血清融化好,大約需要10小時(shí)左右,蛋白先融化,沉降在瓶子的底部,水融化的速度比蛋白慢,于是造成大量蛋白溶于少量的水,此時(shí)就很容易有一些蛋白飽和析出,(大多是脂蛋白和纖連蛋白),這就是血清融化中產(chǎn)生沉淀的重要原因之一。

  采用三步法,只要2.5個(gè)小時(shí),溫和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化過程中可以間斷輕輕搖擺瓶子,讓蛋白在瓶中混勻。

  此方法不但節(jié)約了時(shí)間,而且zui大限度減少了血清沉淀出現(xiàn)的幾率。

  

  其二:血清在培養(yǎng)細(xì)胞中,zui重要的是利用它的活性的因子,因此,融化過程中zui大限度地保留因子的活性,就變得非常重要。
 

  回憶一下,細(xì)胞復(fù)蘇時(shí),要保持細(xì)胞的活性,我們是要遵循“快融”原則還是“慢融”原則呢?

  快融!

  血清同樣如此!

  三步法需要兩個(gè)半小時(shí),

  4℃過夜需要大約10個(gè)小時(shí)(冰箱一般設(shè)2-8℃,所以各實(shí)驗(yàn)室融化時(shí)間會稍有出入)。

  哪個(gè)速度對保留活性更好?不言而喻!
 

  三步法詳細(xì)解讀

  下面,我們詳細(xì)解讀『血清的三步融化法』的步驟:

  圖:剛從-28℃拿出的血清,是這個(gè)樣子的
 

  融化血清*步

  溫度:室溫

  時(shí)間:100ml - 35分鐘

  500ml - 90分鐘

  1000ml - 100分鐘

  或

  溫度:15-20℃水?。ㄐ陆拥淖詠硭?4℃上下)

  時(shí)間:100ml - 5分鐘

  500ml - 18分鐘

  1000ml - 20分鐘

  圖:這是zui近Ausbian血清的大區(qū)周博,在天津血研所實(shí)驗(yàn)室拍到的——實(shí)驗(yàn)人員三步法化血清的圖片,為了節(jié)約時(shí)間,實(shí)驗(yàn)人員采取的是*步20℃水浴18min的方法。(用現(xiàn)接的自來水放入冰凍的血清,即可達(dá)到20℃水浴的效果。一般實(shí)驗(yàn)室沒有能制冷到20℃的水浴鍋)
 

  融化血清第二步

  溫度:20℃水浴(新接的自來水24℃上下)

  時(shí)間:100ml - 15分鐘

  500ml - 25分鐘

  1000ml - 30分鐘

  圖:第二步,仍舊是新接的自來水浴,25min
 

  融化血清第三步

  溫度:37℃水浴

  時(shí)間:100ml - 20分鐘

  500ml - 35分鐘

  1000ml - 45分鐘

  

  
       圖:大家看,使用三步法融化的血清十分清亮,養(yǎng)細(xì)胞的效果也是棒棒噠。
 

  注意

  1.在水浴過程中,血清的平面要*浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動,使血清混勻,但不要產(chǎn)生泡沫!

  2.胎牛血清不推薦熱滅活。

  3.此三步法適用于所有品牌、所有級別的進(jìn)口或國產(chǎn)血清,均可讓血清在減少沉淀、保留活性、提高細(xì)胞培養(yǎng)效果方面,得到不同程度的提高!
 

  看到這里,你是不是迫不及待的想試試融化血清的三步法了呢?

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