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葉酸測(cè)定培養(yǎng)基樣本濃度的測(cè)定步驟

更新時(shí)間:2018-09-26  |  點(diǎn)擊率:962
   葉酸測(cè)定培養(yǎng)基樣本濃度的測(cè)定步驟
  
  葉酸測(cè)定培養(yǎng)基用法
  
  稱取本品9.4g,另稱取50mg抗壞血酸,加熱溶解于100ml蒸餾水中,分裝試管,每管5ml,使沉淀物分散均勻,加入標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品,用蒸餾水補(bǔ)體積至10ml,121℃高壓滅菌5分鐘,備用。
  
  正常人的血清葉酸水平正常為9.9ng/ml。在身體異?;虻貌r(shí),葉酸水平會(huì)顯著變化。葉酸干酪培養(yǎng)基采用干酪乳桿菌(ATCC7469)為測(cè)定用菌,用于葉酸的微生物法測(cè)定。該培養(yǎng)基是基于Flynn等人(1)的配方,并經(jīng)Baker等人(2)和Waters、Mollin(3)改良。用于維生素測(cè)定的測(cè)定菌通常需要三種培養(yǎng)基:維持培養(yǎng)基、接種培養(yǎng)基和測(cè)定用培養(yǎng)基。后者通常是化學(xué)限定的培養(yǎng)基,包含所有測(cè)定菌生長所需的養(yǎng)分,但不含有待測(cè)的分子。類似的,葉酸干酪培養(yǎng)基包含干酪乳桿菌生長所需的所有成分,但不包含葉酸。因而,添加一系列濃度增加的葉酸,會(huì)觀察到干酪乳桿菌生長反應(yīng)的遞增。
  
  樣本葉酸濃度的測(cè)定步驟:如前所述使用0.5,1.0,1.5ml或其他體積的制備好的血清提取物。加入5ml葉酸干酪培養(yǎng)基和足量的蒸餾水,使每個(gè)試管的總體積為10ml。15磅121°C滅菌5分鐘。冷卻試管并向每個(gè)試管中加入一滴接種液。35-37℃孵育18-24小時(shí)后進(jìn)行濁度讀數(shù)。讀數(shù)前將試管冷藏15-30分鐘以停止細(xì)菌生長。620nm檢測(cè)吸光度。待測(cè)樣品中的葉酸含量應(yīng)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定,不過要考慮樣品稀釋度。
  
  葉酸測(cè)定培養(yǎng)基質(zhì)量控制
  
  Ø外觀——米黃色至黃色均一自由流動(dòng)粉末
  
  Ø制備好的培養(yǎng)基顏色和透明度——淡琥珀色透明溶液,可能有輕微沉淀
  
  Ø配比濃度——在25°C下9.4%w/v(8.5g/100ml水)水溶液,pH值為6.7±0.1
  
  ØpH值——6.60-6.80
  
  
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