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國標(biāo)GB4789.4—2016 沙門氏菌檢驗(yàn)操作步驟

更新時(shí)間:2018-10-22  |  點(diǎn)擊率:2071

沙門氏菌(Salmonella)為革蘭氏陰性、兩端鈍圓的短桿菌,它比大腸桿菌細(xì), 也是腸桿菌科的一種重要的致病細(xì)菌。如果食用了被沙門氏菌污染的食品或者藥品后,將會(huì)引起中毒,導(dǎo)致傷寒、腸熱癥、敗血癥和胃腸炎等疾病。

根據(jù)美國疾病控制和預(yù)防中心(CDC)的統(tǒng)計(jì), 每年在美國由沙門氏菌引發(fā)食源性疾病常常居于食源性疾病的前列,目前我們食品監(jiān)管部門依據(jù)國標(biāo)GB4789.4—2016檢測沙門氏菌,具體操作步驟如下:

 

1預(yù)增菌

無菌操作稱取25g(mL)樣品,置于盛有225mLBPW 的無菌均質(zhì)杯或合適容器內(nèi),以8000r/min~10000r/min均質(zhì)1 min~2 min,或置于盛有225 mLBPW 的無菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min。若樣品為液態(tài),不需要均質(zhì),振蕩混勻。如需調(diào)整 pH,用1 mol/mL 無菌 NaOH 或HCl調(diào)pH 至6.8±0.2。無菌操作將樣品轉(zhuǎn)至500mL錐形瓶或其他合適容器內(nèi)(如均質(zhì)杯本身具有無孔蓋,可不轉(zhuǎn)移樣品),如使用均質(zhì)袋,可直接進(jìn)行培養(yǎng),于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)8h~18h。

如為冷凍產(chǎn)品,應(yīng)在45 ℃以下不超過15min,或2 ℃~5 ℃不超過18h解凍。

 

2增菌

輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)過的樣品混合物,移取1mL,轉(zhuǎn)種于10mLTTB 內(nèi),于42 ℃±1 ℃培養(yǎng)18h~24h。

同時(shí),另取1mL,轉(zhuǎn)種于10mL SC內(nèi),于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18h~24h。

 

3分離

分別用直徑3mm的接種環(huán)取增菌液1環(huán),劃線接種于一個(gè)BS瓊脂平板和一個(gè) XLD瓊脂平板(或 HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板),于36℃±1℃分別培養(yǎng)40h~48h(BS瓊脂平板)或18h~24h(XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板),觀察各個(gè)平板上生長的菌落。

 

沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板,締一生物為您推薦使用HiMedia公司(微生物公司)的沙門氏菌顯色培養(yǎng)基(貨號(hào):MV1296),該培養(yǎng)基用植物蛋白胨取代了動(dòng)物蛋白胨,安全性更高;并建立在Rambach培養(yǎng)基配方(2)基礎(chǔ)上。Rambach的配方,是基于沙門氏菌代謝丙二醇產(chǎn)酸的原理。但該培養(yǎng)基僅僅用顯色底物就能鑒別出沙門氏菌這一生化特性。它用于分離和鑒別沙門氏菌,與大腸菌群相區(qū)分,具有更高的敏感度。

 

 

沙門氏菌顯色培養(yǎng)基(貨號(hào):MV1296)在35-37℃孵育24-48小時(shí)后觀察到的培養(yǎng)特征

 

 

4生化試驗(yàn)

三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)或選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。推薦使用HiMedia公司沙門氏菌生化鑒定試劑盒(KB011)

 

沙門氏菌生化鑒定試劑盒(KB011)包含的生化鑒定反應(yīng)有:

甲基紅試驗(yàn)(MR) VP試驗(yàn) 尿素酶 H2S產(chǎn)生 檸檬酸發(fā)酵 賴氨酸脫羧ONPG試驗(yàn)

乳糖發(fā)酵 阿拉伯糖發(fā)酵 麥芽糖發(fā)酵 甘露醇發(fā)酵衛(wèi)矛醇發(fā)酵

 

5血清學(xué)鑒定

檢查培養(yǎng)物有無自凝性、多價(jià)菌體抗原(O)鑒定、多價(jià)鞭毛抗原(H)鑒定、血清學(xué)分型(選做項(xiàng)目)

 

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商,在微生物培養(yǎng)和檢測領(lǐng)域,一如既往地為您帶來的服務(wù)。

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