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細胞培養(yǎng)實驗室對支原體的預防

更新時間:2021-04-08  |  點擊率:739

細胞培養(yǎng)實驗室發(fā)生支原體污染的風險較高。支原體天然存在于周圍空氣(氣溶膠形式)、人的體表(攜帶和隱藏)以及未*消毒的器物表面,而細胞培養(yǎng)基中由于含有血清,營養(yǎng)豐富,很容易導致支原體的快速繁殖。

支原體的污染肉眼不易察覺,直到嚴重的階段才會出現(xiàn)培養(yǎng)基變色、細胞異常等情況。支原體可造成細胞代謝改變,基因表達譜發(fā)生變化,從而嚴重干擾實驗進程。

因此,在細胞培養(yǎng)過程中,定期監(jiān)測是否存在支原體污染,及時預防支原體污染是每個科研人員的工作之一。下面筆者給您推薦幾個支原體防控的產品,僅供參考。這些都是德國Minerva Biolabs公司出品,在國際期刊上也具有很高的引用率。

一、環(huán)境中的支原體污染的預防和清除

Mycoplasma OffTM是一款支原體噴霧劑,用于清除工作區(qū)域中的支原體。它起效快(10秒鐘即起效),安全無毒,對細胞不會產生不良影響,噴灑后,可再用干凈紙張擦拭即可。對于工作臺以及各種細胞操作的器具表面,均可使用。如果是需要避免沾染液體的電子設備,可使用Mycoplasma OffTM濕巾擦拭。

 

細胞孵箱、水浴鍋等有溫水的地方,也容易滋生支原體、細菌等。在循環(huán)水中倒入Water ShieldTM(1:200稀釋)即可有效地預防滋生,效果可持續(xù)1個月左右。

 

Mycoplasma OffTM對許多細菌、病毒也有預防和殺滅作用。

二、細胞培養(yǎng)中支原體污染的祛除

通常來說,被污染的細胞應該丟棄,以避免成為污染源。但對于珍貴的細胞,可使用Minerva Biolabs公司的Mynox®或Mynox Gold®。以往別的品牌的支原體清除劑,其實只是抑制劑,它們抑制支原體的DNA合成和蛋白合成,但無法殺除。Mynox®是市面上一款具有殺滅作用的清除劑。它提取自枯草桿菌,可與支原體膜特異性結合,破壞膜通透性,導致支原體膨脹破裂而死。使用Mynox®一般在2-3個小時即可完成清除任務。

 

Mynox Gold®是Mynox®的升級版,它通過四個療程產生作用。每個療程即細胞傳一代。它除了包括Mynox®,也包含復合抗生素成分。以往別的品牌的支原體清除劑只是針對支原體的抗生素成分,但也容易產生耐藥。Mynox Gold®將Mynox®和抗生素結合,即結合了二者的優(yōu)點,又去除了二者的不足,因為有的細胞對Mynox®的治療不太適應,而Mynox Gold®要比Mynox®更加溫和,對細胞的毒性效應極小,因而更適用于脆弱的不太好養(yǎng)的細胞。

三、細胞培養(yǎng)中支原體污染的預防

Zell ShieldTM直譯過來是細胞盾牌,它不僅能殺菌,還可抑制支原體的蛋白和DNA合成,因而能避免支原體的污染。使用時按1:100的比例加到培養(yǎng)基中,即可使用。它是復合抗生素成分,支原體耐藥的出現(xiàn)幾率很低。

 

四、細胞培養(yǎng)中支原體污染的監(jiān)測

可使用MB公司出品的Venor® Gem系列,是一步法試劑盒(Venor® Gem OneStep),它采用靈敏的PCR方法,能識別常見的至少二十七種支原體。所有試劑均在一管內,為穩(wěn)定的凍干粉形式,用緩沖液溶解后可直接使用。細胞上清取2l即可完成支原體的篩查。

總之,支原體雖然發(fā)生率高,但可放可控。以上僅僅列舉的是實驗室的情況,對于生物制藥企業(yè),如果是病毒液中發(fā)現(xiàn)支原體的污染,也可以采用Mynox®進行清除??傊?,支原體的檢測和預防已成為一項常規(guī)操作,這對保障細胞學實驗的順利進行,是非常重要的。

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