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血清質(zhì)量的鑒定一般包括以下幾個方面

更新時間:2021-12-01  |  點擊率:716

血清的質(zhì)量標準:血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素:一是取材對象,二是取材過程。用于取材的動物應健康無病并且在zhi定的出生天數(shù)之內(nèi),取材過程應嚴格按照操作規(guī)程執(zhí)行,制備出的血清要經(jīng)過嚴格的質(zhì)量鑒定。WHO公布的《用動物細胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求:

牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。

有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。

證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。

血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。

無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染。

對細胞有良好的支持繁殖作用。

我國在對牛血清的質(zhì)量2000年版《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標準》中提出比較嚴格的標準要求。包括蛋白質(zhì)含量,細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內(nèi)毒素,支持細胞增殖檢查。

血清質(zhì)量的鑒定一般包括以下幾個方面:

理化性質(zhì):如滲透壓、pH值、蛋白電泳圖譜、蛋白含量、激素水平、內(nèi)毒素等。蛋白含量包括血清總蛋白含量(不低于35-45g/L)、球蛋白含量(應小于20g/L)、血紅蛋白含量等。其中球蛋白含量是一項非常重要的指標,血清中球蛋白主要是抗體,球蛋白含量越低血清質(zhì)量越高。血紅蛋白也是越低越好。

微生物檢測:包括細菌、真菌、支原體、病毒等。特別是對支原體、病毒的檢測,支原體是一種很小的微生物,可通過孔徑22u的濾膜。支原體、病毒污染在光學顯微鏡下難于察覺,細胞也能生長繁殖,但會影響實驗結果。檢測支原體的方法很多,如培養(yǎng)法、PCR法、熒光染色法、電鏡觀察法等。

促生長效果:這是血清重要的特性之一,應當以培養(yǎng)的細胞來檢測。有兩種方法:克隆形成率、貼瓶率測定法和連續(xù)傳代培養(yǎng)法。

(1)克隆形成率測定:一般以懸浮生長的細胞為培養(yǎng)對象,按有限稀釋法做克隆化培養(yǎng),將不同批號的血清配制成不同濃度的培養(yǎng)基,細胞也稀釋成不同濃度,接種到96孔板,每孔200ul,培養(yǎng)一定時間,統(tǒng)計有克隆生長的孔,計算出百分比,再與對照的標準血清相比較,就可看出不同批號血清間的區(qū)別。比較低的濃度,更能觀察出血清質(zhì)量間的細微差別。

(2)貼瓶率測定:是以貼壁細胞為培養(yǎng)對象,將細胞稀釋至低密度,接種至平皿,每皿200或100個細胞,以不同濃度的血清培養(yǎng)基培養(yǎng),培養(yǎng)一定時間后棄培養(yǎng)基,染色后統(tǒng)計集落數(shù),計算出集落數(shù)占接種細胞數(shù)的百分比,同樣再與標準血清比較,判斷血清質(zhì)量高低。

(3)連續(xù)傳代培養(yǎng)法:是將細胞培養(yǎng)于3個一定體積的培養(yǎng)瓶中,待測血清配制為5%濃度,一般于第七天收集細胞,計數(shù),取平均值,中間可以更換一次培養(yǎng)基。連續(xù)測試三個周期以上,觀察細胞生長狀況,并將每次的計數(shù)結果與標準血清的測試結果比較。

對于使用者,判斷血清質(zhì)量先從外觀入手。好的血清應該是透明清亮,土黃色或棕黃色,無沉淀或極少沉淀,比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁、不透明、含許多沉淀物,說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性;若血清呈棕紅色,說明血清中的血紅蛋白含量太高,取材時有溶血現(xiàn)象;如果搖晃時感覺液體稀薄,說明血清中摻入的生理鹽水太多。如果要進一步了解血清的質(zhì)量,則應連續(xù)培養(yǎng)某些細胞,觀察細胞生長狀況。

科研實驗中,細胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細胞,如:干細胞、肝細胞,神經(jīng)細胞,原代培養(yǎng)、細胞融合、轉(zhuǎn)染細胞等。

Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠前,均經(jīng)過嚴格質(zhì)控,每個批次附有詳細完整的《檢測報告》,包括:品名,貨號,批號,血源地,生產(chǎn)日期,保質(zhì)期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無菌檢查(細菌、真菌、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應等)、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

實驗人對于新批次血清,應認真審閱《檢測報告》,做好試用前篩選第一步。(如何看懂《檢測報告》,可登陸“締一生物"網(wǎng)站,留言技術部,得到免費幫助。)

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