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如何識破支原體污染

更新時間:2021-12-23  |  點擊率:746

支原體(mycoplasma)是一種沒有細胞壁的最小原核細胞。在細胞培養(yǎng)過程中,支原體污染率達到60%以上,當細胞(特別是傳代細胞)被支原體污染后,細胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變,污染嚴重時細胞生長緩慢,細胞形態(tài)發(fā)生改變,并出現(xiàn)細胞病變。因而細胞培養(yǎng)過程中,防止支原體污染是一個世界性的難題。

支原體污染細胞后很難察覺,同時若細胞培養(yǎng)過程受到了支原體污染,*清除支原體也是非常困難的。因此在細胞培養(yǎng)過程中,定期進行支原體檢測,在源頭上清除支原體污染,并做好支原體預防工作顯得尤為重要。翊圣生物為了呵護您的細胞免受支原體的污染,除提供支原體檢測試劑盒以外,還包括支原體清除試劑和對正常細胞提供支原體預防試劑,以防支原體污染。

支原體污染的檢測及鑒定方法

01、分離培養(yǎng)法

支原體的病原學檢測主要是從被污染的細胞、雞胚中分離培養(yǎng)出支原體來確定,分離培養(yǎng)法是檢測支原體污染中最為可靠準確的方法。但是支原體對環(huán)境的影響敏感,容易被滅活,而且分離培養(yǎng)操作相對繁瑣,所需時間較長,因此只能夠?qū)χгw污染進行定性觀察。分離培養(yǎng)法在常規(guī)的支原體檢測中多用于輔助其它檢測方法。

02、DNA熒光染色法

DNA熒光染色法較分離培養(yǎng)法縮短了檢測周期,主要用于細胞培養(yǎng)中污染支原體的檢測。DNA熒光染色法正是利用熒光染色劑雙苯咪唑(Bisbenzimidzole)Hoechst33258能夠結(jié)合支原體DNA中的A-T堿基富集區(qū)域的原理,被支原體污染的細胞經(jīng)染色后,其細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一的熒光點,即是富含A-T堿基區(qū)域的支原體DNA。

03、PCR技術(shù)

PCR作為一種快速、靈敏、特異且簡便的基因診斷技術(shù)已應用于科學研究和疾病的診斷。根據(jù)支原體基因組內(nèi)的保守序列設計特異引物,對待檢樣品的核酸進行擴增,通過對擴增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。PCR檢測技術(shù)用于支原體污染的檢測,周期短、靈敏度高、特異性好、操作簡單且一次可檢測大量樣品。

04、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)

ELISA用于支原體污染的檢測中,有著良好的特異性和敏感性,一次可以完成大量樣品的檢測。如今已有LONZA等公司開發(fā)了針對細胞中污染支原體的檢測試劑盒,具有簡便、快速與定量定性檢測等特點。

05、電鏡

一般在細胞培養(yǎng)48~72小時,細胞接近匯合前,用胰酶消化細胞制成細胞懸液后進行固定、包埋、切片后才能進行觀察。

06、定期檢測

支原體感染會使培養(yǎng)細胞慢慢枯萎,因此對培養(yǎng)細胞定期進行支原體檢測非常重要。一般來說每1至3個月就應該進行一次支原體檢測。將定期支原體檢測常規(guī)化堅持下去,是細胞培養(yǎng)實驗室應對支原體感染的關(guān)鍵。

Mycoplasma OffTM是一款支原體噴霧劑,用于清除工作區(qū)域中的支原體。它起效快(10秒鐘即起效),安全無毒,對細胞不會產(chǎn)生不良影響,噴灑后,可再用干凈紙張擦拭即可。對于工作臺以及各種細胞操作的器具表面,均可使用。如果是需要避免沾染液體的電子設備,可使用Mycoplasma OffTM濕巾擦拭。


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