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細胞培養(yǎng)中的污染監(jiān)控與檢測——細菌

更新時間:2022-03-03  |  點擊率:806

細胞培養(yǎng)是生物醫(yī)學研究的常見操作,其中避免細菌污染是重要一環(huán)。細胞是否干凈,直接關系到實驗結果穩(wěn)定性的好壞。

一般情況下細胞實驗過程中出現(xiàn)的常見污染主要有:細菌污染、真菌污染和支原體污染。每種情況又分別有不同的癥狀和解決方法。

我們將分三篇文章,簡要概述三種不同污染的癥狀及處理方法。

一、細菌污染

細菌概述

細菌是一種原核細胞微生物,一般為微米級別。細胞培養(yǎng)過程中常見的污染菌為大腸桿菌、葡萄球菌、假單胞菌等。

細菌污染癥狀

與其他污染相比,細菌污染在細胞培養(yǎng)過程中“發(fā)病"更為迅速,較容易被發(fā)現(xiàn)。具體表現(xiàn)為:

  • 細胞培養(yǎng)基短期內(nèi)變黃且渾濁(大量酸性物質累積)

  • 靜置的培養(yǎng)液時不渾濁,但稍加震蕩,就有許多渾濁物漂起

  • 可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮

  • 細胞停止生長并有中毒表現(xiàn),后出現(xiàn)大量死亡

細菌污染鑒定

簡易方法:

1、取少量培養(yǎng)液涂片染色檢查,憑經(jīng)驗判斷細菌種類。

2、向肉湯培養(yǎng)基內(nèi)滴入少量培養(yǎng)液,37 ℃培養(yǎng)以檢測。

專業(yè)試劑盒檢測:

Minerva Biolabs公司的細菌PCR檢測試劑盒為例(點擊下方圖片直達微信商城,了解更多詳情):


該試劑盒采用PCR方法,用于檢測生物樣品(包括細胞培養(yǎng)物和病毒貯存液)中是否存在細菌。根據(jù)序列分析,該試劑盒可檢測超過45種細菌屬,其中含污染細胞的常見菌屬:


試劑盒包括

凍干混合物:含引物/核苷酸/內(nèi)部擴增對照DNA /聚合酶

復溶緩沖液

凍干的陽性對照DNA

PCR級水


樣本處理

樣本不用提DNA,只需熱滅活(95 °C 5分鐘)。樣本需不含抗生素。如含抗生素,則細胞應在不含抗生素的培養(yǎng)基中再培養(yǎng)至少一代。


保質期

2-8℃可保存至少6個月。

凍干試劑溶解后,需在-18℃以下保存。


結果分析:


內(nèi)控對照顯示PCR反應正常,樣本中無PCR抑制成分。460bp左右存在目的條帶,提示存在細菌污染。


細菌污染的祛除

對于一般細胞:發(fā)生污染直接丟棄,并對環(huán)境進行消殺,紫外線滅菌、消毒液擦拭培養(yǎng)箱、工作臺等。

對于重要且污染相對較輕的細胞:一般用抗生素的常用量的 5~10 倍作沖擊療法,用藥 24~48 小時后再換常規(guī)培養(yǎng)液,需要注意的是:


一旦發(fā)生污染后再使用抗生素常常難以*,有的抗生素只有抑菌作用而無殺菌效應。


且有研究表明,大量使用抗生素,或對細胞基因組產(chǎn)生影響。


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