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您了解支原體qPCR法嗎?

更新時間:2022-03-14  |  點擊率:712

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%,因而細(xì)胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個世界性的難題。細(xì)胞培養(yǎng)中常遇見的有細(xì)菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。說起支原體污染,估計細(xì)胞培養(yǎng)的同學(xué)就開始犯愁了,細(xì)胞培養(yǎng)的老手都知道,支原體污染非常不易察覺。有的實驗室被支原體污染后,如果不進行有效*的支原體清除,該實驗的細(xì)胞培養(yǎng)很難進行下去,細(xì)胞傳代3代以后狀態(tài)就急劇下滑,無法進行正常實驗,有的實驗室甚至只能指望換細(xì)胞間。那么怎樣才能有效檢測并清除支原體污染呢?

支原體qPCR法介紹:

熒光定量PCR法(qPCR):是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上,將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記,使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光,利用熒光信號的變化和配套軟件,進行DNA擴增反應(yīng)的實時監(jiān)測,簡稱qPCR。

優(yōu)點:①靈敏度高、特異性強。

②時間短,2-3小時出結(jié)果。

③檢測結(jié)果可定量。

④操作簡便。

缺點:①對于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結(jié)果會出現(xiàn)假陽性。(可用培養(yǎng)法做補充驗證)

②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大(由于引物及內(nèi)在設(shè)計不同),需謹(jǐn)慎選擇,盡量在專業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。

『支原體qPCR檢測試劑盒』介紹

德國MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測試劑盒(均為探針法檢測),依據(jù)操作步驟的細(xì)微差別,

分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。

此兩類試劑盒較其他廠家同類產(chǎn)品,具有以下*的優(yōu)點:

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性,一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體),根據(jù)序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單,易于觀察。

(使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽性,其他微生物或真核細(xì)胞均為陰性,無交叉反應(yīng))

 

您了解支原體qPCR法嗎?

 

 

特點

1. 內(nèi)控對照為獨立包裝,遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2. 高特異性,一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細(xì)胞的支原體物種(包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體)。與細(xì)菌和真核DNA無交叉反應(yīng)。

3. 高靈敏度,zui低檢測限可達(dá)到≤10CFU/ml。

4. 有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA,便于特異性驗證。

5.有相應(yīng)配套的支原體絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品,便于最后定量檢測。

 

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