一.活細(xì)胞觀(guān)察

鏡下觀(guān)察：

細(xì)胞無(wú)色透明，倒置顯微鏡或相差顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)：細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)。

生長(zhǎng)狀態(tài)好:胞內(nèi)無(wú)顆粒,不見(jiàn)空氣,胞膜清晰,上清液透明，無(wú)懸浮細(xì)胞和碎片。

生長(zhǎng)狀態(tài)不好：胞質(zhì)出現(xiàn)空氣脂滴和顆粒狀物，細(xì)胞之間的空隙加大細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則。

1.活性染料：

原理：能進(jìn)入活細(xì)胞,一些無(wú)毒或毒性很小的染料,電性吸引而堆積在細(xì)胞中某些特定的結(jié)構(gòu)從而顯色,不引起物理和化學(xué)變化,對(duì)細(xì)胞生命活動(dòng)不會(huì)產(chǎn)生影響或影響很少。

包括：中性紅、結(jié)晶紫、健那綠、次甲基藍(lán)、甲苯胺藍(lán)、亮焦油紫。

特點(diǎn)：它們解離后帶正電荷，屬堿性染料與胞內(nèi)構(gòu)造有一些結(jié)合。

二．固定染色方法

1．固定：迅速殺死細(xì)胞再染色進(jìn)行觀(guān)察。

目的：使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、核酸及糖等轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，避免自溶腐bai。固定的細(xì)胞保持原有結(jié)構(gòu)，保存時(shí)間長(zhǎng)。

由于固定劑性能不同，如一種固定劑對(duì)某種結(jié)構(gòu)保存效果好，但對(duì)別的結(jié)構(gòu)就不一定適合，染色劑對(duì)細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)成分有不同的親和力，所以每種組織通常有一些特定的固定染色方法。

一.常用固定劑包括:

1.75％酒精、

2.4％多聚甲醛（多聚甲醛為粉末狀，緩慢加入在60℃水浴中溶化），

3.甲醛/冰醋酸（冰醋酸1份：甲醛3份），

4.FAA（80％乙醇90ml、冰醋酸5ml、中性福爾馬林5ml）

5.中性福爾馬林：福爾馬林10ml、Na2HPO4(無(wú)水)0.78g、NaH2PO4(無(wú)水)0.42g加0.85%NaCl至100ml。

6.Carnory固定液：純酒60ml、氯仿30ml、冰醋酸10ml。

二. 染色方法：

使死細(xì)胞著色的大多數(shù)是酸性染料，它們不易穿透活細(xì)胞的質(zhì)膜，進(jìn)入胞內(nèi)，卻能滲進(jìn)死亡的細(xì)胞，使死細(xì)胞著色。

（1）臺(tái)盤(pán)藍(lán)(trypan bule)

0.4%～1%溶于生理鹽水，pH7.0～7.2，取0.1ml/ml細(xì)胞懸液染色2分鐘后鏡下觀(guān)察死細(xì)胞為藍(lán)色。此染色時(shí)間不易過(guò)長(zhǎng)，有毒性，如染15分鐘以上，活細(xì)胞會(huì)受到損傷而著色。另外，臺(tái)盤(pán)藍(lán)不宜久存時(shí)間長(zhǎng)了有毒性。（藍(lán)色）

（2）苯胺黑 (Amiline black)

0.05%苯胺黑Hanks溶液以1：10量細(xì)胞懸液混合1～2分鐘后，鏡下觀(guān)察：死細(xì)胞著黑色，苯胺黑染料毒性很小。

（3）赤蘚紅B(Erythrosin B)

PBS或Hanks溶液洗去血清取細(xì)胞與0.02%赤蘚紅B混合，兩小時(shí)之內(nèi)鏡檢:死細(xì)胞著紅色。

（4）伊紅Y(Eosin Y)

細(xì)胞懸液與7倍量的0.15%伊紅Y染液（生理鹽水配制）混合2分鐘后鏡檢，死細(xì)胞為桃紅色。

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