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血清有沉淀怎么辦?

更新時間:2022-09-07  |  點擊率:721

細胞培養(yǎng)過程中的血清沉淀

在日常實驗過程中,一些同學或多或少都會遇到血清出現(xiàn)沉淀的情況。那么問題來了:

血清中的沉淀是什么?

這些沉淀是如何產(chǎn)生的?

沉淀對細胞培養(yǎng)會造成影響嗎?

如何減少血清沉淀?

如果你也關(guān)心這些問題,那就跟著我們一起,來到今天的血清科普小課堂吧,幫你一篇理清血清沉淀的各種問題!

細胞培養(yǎng)中

血清沉淀從何而來?

一般來說,血清沉淀的成分可以簡單分為以下幾種:

1、纖維蛋白:常見的體積比較大的沉淀物,達 1-2mm,肉眼可見。因為一些血清在收集和快速處理過程中,存在纖維蛋白原(可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體),處于溶解狀態(tài),但經(jīng)過濾分裝后,就會在瓶中凝結(jié)出現(xiàn)纖維蛋白的沉淀。

2、磷酸鈣:會使血清出現(xiàn)渾濁的一種沉淀物,并且在 37℃ 培養(yǎng)時出現(xiàn)增加。這類沉淀物鏡下觀察是一個小黑點,由于布朗運動,它們看上去仿佛可以運動,因此常被誤認為是微生物污染。

3、膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì):也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。

細胞培養(yǎng)中

血清沉淀有何影響?

血清沉淀會影響細胞生長嗎?

一般情況下,沉淀物不會影響細胞培養(yǎng),但如果細胞對于營養(yǎng)物質(zhì)有特殊需求,沉淀物中的成分不能被細胞吸收,可能會引起細胞長勢較差。

血清沉淀會影響細胞實驗嗎?

會影響血清過濾。一些特殊實驗中,需要對細胞培養(yǎng)基進行過濾,如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物,混入培養(yǎng)基中,會導致過濾孔被堵塞,影響過濾效果。

血清沉淀導致細胞污染嗎?

一般情況下,正常的沉淀物不會導致細胞污染。

但多數(shù)情況下,血清沉淀會對我們判斷細胞是否出現(xiàn)污染造成困擾。

絮狀沉淀容易和真菌、細菌混淆;磷酸鈣沉淀引起的小黑點容易與支原體污染混淆。

細胞培養(yǎng)中

血清沉淀從何而來?

剛出廠的血清,應(yīng)該是澄清透明的,為了保證品質(zhì),血清會儲存在-20℃的環(huán)境中。如果運輸過程中,出現(xiàn)了溫度忽高忽低,反復凍融的情況,就容易析出大量沉淀。

另外,不正確的解凍方法也會引起血清產(chǎn)生大量沉淀。

細胞培養(yǎng)中

如何減少血清沉淀?

1、正確的運輸溫度:運輸過程中,要嚴格-20℃低溫,避免反復凍融。

2、使用正確的融化方法:在使用時,正確的解凍方法也很重要,這里推薦使用國際上通用的“三步法”解凍。

需要注意的是,如果血清是儲存在-80℃冰箱中,正式解凍前應(yīng)先轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中過渡。

一次解凍后,分裝至無菌離心管中,盡量保證每管是一次的用量,分裝管解凍也遵循三步法,解凍后需全部用完。

3、使用正確的儲存方式:長期儲存在 2-8℃或在室溫下放置時間過長,都會引起沉淀,建議配制好的*培養(yǎng)基在4℃冰箱中存放不要超過7天,血清分裝好后-20℃儲存。

4、特殊的處理:γ射線照射與熱滅活也容易引起沉淀析出,因此要注意射線照射劑量以及熱滅活方法(40℃水浴加熱20分鐘即可)。

細胞培養(yǎng)中

如何去除沉淀?

如果要除去血清中的沉淀,可以將血清分裝至無菌離心管中,大約400g 離心,留上清即可。由于濾膜容易被沉淀堵塞,因此不建議用過濾的方法。

血清品質(zhì)

沉淀不是檢驗血清的硬指標,但為了實驗準確、實驗美觀、實驗便利,還是應(yīng)該盡量減少沉淀的產(chǎn)生。掌握正確的血清解凍、使用方法,再加上一款品質(zhì)穩(wěn)定的優(yōu)秀血清,對于細胞實驗來說,至關(guān)重要。

正確的使用方法與優(yōu)質(zhì)的血清,二者缺一不可。

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