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Ausbian 干細胞*培養(yǎng)基,降低了干細胞培養(yǎng)的技術門檻

更新時間:2022-10-19  |  點擊率:617

干細胞是一類具有無限的或者永生的自我更新能力的細胞、能夠產生至少一種類型的、高度分化的子代細胞[1]。

干細胞被認為可以提供一種理想的生物學平臺, 用于多方面的科學研究與臨床應用, 如藥物篩選平臺的建立、細胞發(fā)育與分化的分子調節(jié)機制研究、基因靶向敲除動物模型的構建、組織工程種子細胞及基因治療載體的建立、細胞治療及再生醫(yī)學等[2]。

干細胞研究離不開干細胞的培養(yǎng)。合格的干細胞培養(yǎng)的過程,包括促進其分裂增殖和維持其未分化狀態(tài)。

基于以上兩點要求,目前主流的標準培養(yǎng)方法為飼養(yǎng)層培養(yǎng)法:

即在有絲分裂失活的飼養(yǎng)層細胞 (FEEDER) 上培養(yǎng)干細胞。培養(yǎng)體系一般為高糖DMEM,添加適量的胎牛血清 (FCS) 及白血病抑制因子 (LIF)、L-谷氨酰胺等添加劑。

另外,為了避免外源性物質的干擾(如血清、病原等成分)[3],又嘗試及建立了其他培養(yǎng)基, 包括條件培養(yǎng)基 (CM) 、無飼養(yǎng)層、無血清、血清替代物 (SR) 非條件培養(yǎng)基等。

其中無血清培養(yǎng)基中添加了更多珍貴的細胞因子,而血清替代物培養(yǎng)基則采用人工/半人工合成分子替代物的形式,來替代血清,成本相較于普通胎牛血清*培養(yǎng)基而言,高出不少。

01

飼養(yǎng)層培養(yǎng)法

目前認為,飼養(yǎng)層能夠提供干細胞接觸所必需的復雜蛋白分子。自1981年EVANS等人[4]用飼養(yǎng)層成功培養(yǎng)了mESC起,飼養(yǎng)層培養(yǎng)法便開始不斷發(fā)展。實驗過程,主要分為以下三步:配制飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)基、準備飼養(yǎng)層細胞、配制飼養(yǎng)單層細胞培養(yǎng)基、飼養(yǎng)單層制備、配制干細胞培養(yǎng)基、接種干細胞培養(yǎng)。

飼養(yǎng)層培養(yǎng)法卻存在著不可避免的缺點:

1、 飼養(yǎng)層細胞生命期有限,不能在體外長期傳代。在體外傳代時間太長,其產生促增殖因子和抑制分化因子的能力會減弱甚至喪失。

2、 MEF細胞的染色體干擾:飼養(yǎng)層細胞會影響干細胞遺傳物質?!?/p>

3、 絲裂su素-C的影響:飼養(yǎng)層細胞需要用到絲裂su素-C,該物質可能會影響干細胞的增殖。

4、 異種抗原及污染的影響:飼養(yǎng)層細胞作為異種抗原也會影響干細胞的健康,還有發(fā)生細胞間融、引入其他動物源性病原體,給臨床移植治療帶來風險。

5、 所用試劑復雜,批次不可控:所用材料的批次之間的波動,限制了培養(yǎng)物之間的可重復性。

6、 實驗周期長,培養(yǎng)基配制復雜:在基礎培養(yǎng)基的基礎上,添加例如白血病抑制因子(LIF)[6]這樣的多功能細胞因子,但無論進口還是國產的產品,都不免有價格高昂的缺點。而自己配制,又會面臨操作繁瑣、易污染等問題。飼養(yǎng)層培養(yǎng)從培養(yǎng)飼養(yǎng)細胞開始,至少需要一周時間才能得到所需的干細胞,周期過長。

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02

無飼養(yǎng)層培養(yǎng)

無飼養(yǎng)層培養(yǎng)類似普通細胞培養(yǎng),主要分為以下幾個步驟:培養(yǎng)瓶預處理、配制培養(yǎng)基、消化/復蘇干細胞、接種、培養(yǎng)。

相較于飼養(yǎng)層培養(yǎng)法,無飼養(yǎng)層培養(yǎng)法的優(yōu)點顯而易見:更加簡便、節(jié)省時間;但缺點也十分明顯:

1、 培養(yǎng)的細胞質量不穩(wěn)定:由于自行配制的培養(yǎng)基,不可控因素較多,缺少營養(yǎng)細胞對的存在,干細胞生長狀況也不穩(wěn)定,直接影響實驗結果。

2、 成本高昂:商品化的培養(yǎng)基,根據品質不同,價格也是從幾百元到幾千元不等,直接增加了干細胞的培養(yǎng)成本。

3、 需要不斷對培養(yǎng)基進行調整,對實驗人員有很高的要求:無飼養(yǎng)層培養(yǎng)法需要人為添加各種各樣的細胞因子,不同的干細胞還需要進行細微的調整以適應不同的生長需求,因此培養(yǎng)難度更高,對技術人員的操作水平及經驗有很高的要求

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03

干細胞*培養(yǎng)基培養(yǎng)法

一直以來,干細胞的培養(yǎng)方法被飼養(yǎng)層培養(yǎng)法和無飼養(yǎng)層培養(yǎng)法所“統(tǒng)治“,近日,一項新技術——干細胞*培養(yǎng)基培養(yǎng)法問世!這項重大突破,兼顧了上述兩種培養(yǎng)法的優(yōu)點又巧妙規(guī)避了它們的致命缺點,大大降低了干細胞培養(yǎng)的技術門檻

干細胞*培養(yǎng)基是一種真正意義上的全新干細胞培養(yǎng)技術!

在含微量胎牛血清的基礎培養(yǎng)基中,通過添加一種人永生化干細胞系的條件培養(yǎng)基混合組成。干細胞*培養(yǎng)基含有多種促進細胞增殖的生長因子,如EGF、FGF、NGF、HGF、BDNF、PDGF、VEGF、TGF及干細胞分化抑制因子等。

因此,干細胞*培養(yǎng)基具有促進干細胞增殖、抑制干細胞分化及維持干細胞表型,增加干細胞的傳代次數的作用,可廣泛應用于人及動物的胚胎干細胞、間充質干細胞及各種組織來源的成體干細胞的培養(yǎng)。

由于人永生化干細胞系的使用,使得干細胞*培養(yǎng)基無需額外添加細胞因子或其他人工合成促生長成分,因此,相較于其他商品化的干細胞培養(yǎng)基、干細胞培養(yǎng)Kit、無血清培養(yǎng)基、血清替代物 (SR) 非條件培養(yǎng)基等產品,用干細胞*培養(yǎng)基進行實驗,成本相對更低,但效果卻是更上一層樓。

縱觀整個干細胞培養(yǎng)基市場,能同時滿足以上幾個條件的產品可以說是鳳毛麟角。而Ausbian干細胞*培養(yǎng)基則是其中的優(yōu)秀代表,讓實驗者可以輕松上手,各種干細胞培養(yǎng)都變得小菜一碟!


  • 維持干細胞的干性,抑制干細胞的分化

  • 無需額外添加和二次配制,使實驗更簡單

  • 普適性高,理論上滿足各類干細胞生長需求

  • 經過嚴格的質量檢驗,內毒素極低

  • 我國自主研發(fā),供貨穩(wěn)定,供貨周期短


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