細(xì)胞消化是細(xì)胞培養(yǎng)過程中不可少的環(huán)節(jié)之一。細(xì)胞消化操作不當(dāng)，容易改變細(xì)胞狀態(tài)，引起細(xì)胞實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生不必要的誤差，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。

因此，正確合理的細(xì)胞消化操作，至關(guān)重要。

細(xì)胞消化小技巧

細(xì)胞潤(rùn)洗次數(shù)

絕大部分細(xì)胞

用胰酶潤(rùn)洗

一次即可

胰酶是一種蛋白酶，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時(shí)，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。

由于在細(xì)胞培養(yǎng)中，胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。胰酶作用時(shí)間過長(zhǎng)、作用次數(shù)過多，都容易破壞細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)。

在吸去培養(yǎng)基后，用37℃預(yù)熱過的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞表面1-2次，隨后加入適量胰酶，以能夠平鋪在器皿底部一層，略蓋過細(xì)胞為原則，且潤(rùn)洗一次即可?？煞湃?7℃培養(yǎng)箱中孵育1-2分鐘。

何時(shí)終止消化

貼壁細(xì)胞層

呈流沙狀可移動(dòng)

即可終止消化

有不少細(xì)胞培養(yǎng)人員，喜歡把全部細(xì)胞，消化成間隔分布很離散的單個(gè)圓形的細(xì)胞，但實(shí)際上，此時(shí)的細(xì)胞已經(jīng)處于“消化過度"的狀態(tài)了。

因此，肉眼觀察下，50%左右細(xì)胞呈現(xiàn)流沙狀，或鏡下觀察細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，即可加入胰酶2-3倍體積的含血清培養(yǎng)基，終止消化。

血清可以終止胰酶對(duì)細(xì)胞的消化，也為細(xì)胞提供*營(yíng)養(yǎng)。選擇一款優(yōu)質(zhì)的胎牛血清，為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)提供保障。

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不用胰酶如何消化細(xì)胞

EDTA消化

或物理刮涂法

也可使細(xì)胞脫壁

只用EDTA，或者用胰酶-EDTA（Trypsin-EDTA）聯(lián)合作用，也可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化。其中，胰酶切割ECM的一些負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合鈣離子，作用于整合素的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在胰酶中添加EDTA，可以對(duì)付特別難消化的細(xì)胞。

用細(xì)胞刮也可以對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行物理脫壁。使用時(shí)側(cè)拿培養(yǎng)器皿，用無菌細(xì)胞刮沿一個(gè)方向轉(zhuǎn)動(dòng)掛，集于底部，直至刮完每一個(gè)角落即可。

另外，需要注意的是，在做細(xì)胞凋亡檢測(cè)時(shí)，不適合用含有EDTA的胰酶，可以使用物理方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行脫壁處理。Annexin V常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，是一種鈣離子依賴的蛋白，EDTA會(huì)螯合鈣離子從而影響Annexin V，進(jìn)而影響結(jié)果，因此需選用不含EDTA的胰酶。

本期內(nèi)容到這里就結(jié)束了，想看更多細(xì)胞培養(yǎng)小技巧，歡迎給我們留言！