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貼壁細(xì)胞怎么高效傳代?

更新時(shí)間:2023-01-30  |  點(diǎn)擊率:701

貼壁生長的細(xì)胞,在培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿長至單層鋪滿的狀態(tài)后后,空間已基本上飽和,細(xì)胞生長、增殖受阻,為使其繼續(xù)擴(kuò)增或生長,需要進(jìn)行傳代(再培養(yǎng))處理。同時(shí),傳代培養(yǎng)也可用于細(xì)胞種的保存。不僅如此,各種細(xì)胞實(shí)驗(yàn)也是以高效的細(xì)胞傳代為基礎(chǔ)的。

懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞則需經(jīng)消化等處理后才能分瓶。一般使用胰蛋白酶,將貼壁細(xì)胞消化成成單個(gè)細(xì)胞,也可加入EDTA提高消化能力(EDTA 是一種二價(jià)離子的螯合劑,能抑制細(xì)胞膜上的Ca2+和Mg2+)。常用的細(xì)胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA。

實(shí)驗(yàn)時(shí),先用吸去細(xì)胞培養(yǎng)上清,用PBS清洗細(xì)胞,棄掉洗滌液,重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(根據(jù)培養(yǎng)皿的大小不同,一般2-5ml消化液即可,以剛好鋪滿整個(gè)皿底為原則),觀察細(xì)胞直到細(xì)胞變圓脫離瓶壁,此過程一般需要3-5分鐘,為了避免細(xì)胞成團(tuán),消化細(xì)胞的過程中不要拍打細(xì)胞瓶。對于特別難消化的細(xì)胞,可以加入胰酶EDTA 消化液后把細(xì)胞置于37°C 促進(jìn)消化,細(xì)胞脫離瓶壁后,立刻加入含有血清的培養(yǎng)基中止消化。

800-1000rpm,離心5分鐘,然后棄去中止用的培養(yǎng)基,加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細(xì)胞,移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細(xì)胞類型而定。胰蛋白酶會對某些細(xì)胞的細(xì)胞膜產(chǎn)生損傷,對于這種類型的細(xì)胞,可用細(xì)胞刮輕輕刮下細(xì)胞,加入適量的培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻細(xì)胞,然后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

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