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胎牛血清正確解凍方法步驟詳解

更新時(shí)間:2024-04-19  |  點(diǎn)擊率:479

在解凍胎牛血清之前,需要做好準(zhǔn)備工作。首先,應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)室環(huán)境清潔,避免污染,可以使用紫外線照射無(wú)菌工作臺(tái)和實(shí)驗(yàn)空間,同時(shí)配合使用實(shí)驗(yàn)室微生物污染祛除類試劑,比如德國(guó)Minerva Biolabs生產(chǎn)的Mycoplasma Off支原體祛除噴霧劑,對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔,降低胎牛血清在解凍、分裝或使用過(guò)程中被污染的可能性。其次,準(zhǔn)備好所需的實(shí)驗(yàn)器材,如無(wú)菌移液管、無(wú)菌試管,并確保這些器材是嚴(yán)格無(wú)菌的。此外,還需檢查胎牛血清的包裝是否完好無(wú)損,如有破損或污染,則不應(yīng)使用。

 

胎牛血清這種混合物中,融化速度:蛋白質(zhì)等干物質(zhì)>水這類溶劑,所以蛋白質(zhì)會(huì)先溶解析出,而水還是結(jié)成冰的狀態(tài),導(dǎo)致瓶子中間會(huì)出現(xiàn)一根透明的冰柱,而周圍則會(huì)呈現(xiàn)上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài),在使用過(guò)程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過(guò)高等問(wèn)題,影響細(xì)胞生長(zhǎng)。

 

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更重要的一點(diǎn)是,血清中珍貴的生長(zhǎng)因子等活性物質(zhì),它們?cè)诮鈨鲞^(guò)程中,有著與細(xì)胞復(fù)蘇類似的經(jīng)歷,都需要快速解凍才能很大程度地保留生物活性。顯然,4℃過(guò)夜這樣的長(zhǎng)時(shí)間處理,很有可能會(huì)導(dǎo)致一部分「營(yíng)養(yǎng)成分」的損失,影響細(xì)胞生長(zhǎng)。因此,正確的解凍方法,應(yīng)該是盡可能讓胎牛血清所有成分同時(shí)融化。

 

我們推薦使用更科學(xué)“三步法"對(duì)胎牛血清進(jìn)行解凍。根據(jù)待解凍的胎牛血清的量不同,按照下表中的建議時(shí)長(zhǎng)與溫度對(duì)其進(jìn)行處理。需要注意的是,如果血清是儲(chǔ)存在-80℃冰箱中,正式解凍前應(yīng)先轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中過(guò)渡。


操作

溫度

100ml

500ml

1000ml

步驟一

室溫

35 min

90 min

100 min

或15-20℃水浴

5 min

18 min

20 min

步驟二

20℃水浴

15 min

25 min

30 min

步驟三

37℃水浴

20 min

35 min

45 min


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