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如何高效清除細胞中的支原體污染?

更新時間:2024-07-06  |  點擊率:588

在細胞培養(yǎng)過程中,支原體污染是一個常見且棘手的問題。支原體是一種介于細菌和病毒之間的原核生物,形態(tài)多樣,沒有細胞壁,且能夠直接穿過常規(guī)的除菌濾膜,因此極易造成細胞培養(yǎng)污染。支原體污染不僅會影響細胞的正常生長和代謝,還可能改變細胞的基因表達,干擾實驗結(jié)果,甚至導(dǎo)致實驗失敗。

 

一般情況下,細胞感染支原體,我們建議直接丟棄并對環(huán)境進行消毒處理,但總有一些特殊情況,導(dǎo)致我們不能丟棄辛苦培養(yǎng)的細胞,這時就可以派細胞用支原體祛除試劑上場了。

 

1、對于已發(fā)生支原體污染的細胞,不愿隨意丟棄,希望繼續(xù)培養(yǎng)時,可選擇Zell Shield®細胞支原體祛除試劑(貨號:13-0050/13-0150)。

 

如已轉(zhuǎn)染或大量擴增的細胞等情況,需要對已被支原體污染的細胞進行拯救。使用含有復(fù)合抗生素成分的Zell Shield®細胞支原體祛除試劑,可以抑制支原體蛋白和DNA合成,同時對細菌和真菌也有抑制作用。

 

先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法"處理好細胞,再使用加了Zell Shield®細胞支原體祛除試劑的培養(yǎng)基養(yǎng)細胞,按照使用說明進行操作,使用Zell Shield®細胞支原體祛除試劑培養(yǎng)4代后,細胞中的支原體即可祛除。

 

懸浮沖洗法及試劑使用方法:

1)消化細胞:將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中的細胞消化下來。

2離心:將消化好的細胞寄培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中,進行常規(guī)離心。

3清洗細胞:棄上清后,用無菌PBS輕柔吹打清洗細胞。

4)重復(fù)清洗:將PBS和細胞的混合物進行低速離心,棄上清并重復(fù)清洗3.

5)重新培養(yǎng):最后一次清洗結(jié)束后,棄掉PBS上清液,加入含有Zell Shield®細胞支原體祛除試劑的新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng),4代后,細胞中的支原體即可祛除。

 

 

2、對于無法長期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液,則可以使用德國MB公司的Mynox®珍貴生物樣品支原體清除試劑(貨號: 10-0200/ 10-0500/ 10-1000)。

 

該試劑含有「治療液」和「鞏固防護液」?!钢委熞骸箒碜钥莶輻U菌提取物,可特異性地與支原體膜結(jié)合,改變支原體膜通透性,從而使支原體在2-3小時內(nèi)破潰死亡;「鞏固防護液」加入培養(yǎng)基,后續(xù)培養(yǎng)一個月,細胞將會清除支原體的污染,確切有效。

 

使用方法:

1)細胞重新傳代時,用含Mynox®珍貴生物樣品支原體清除試劑、5%FBS的的培養(yǎng)基替換原有培養(yǎng)基,對細胞進行培養(yǎng)。

2)孵育培養(yǎng)2-3小時。

3)對細胞進行換液。

4)用不含Mynox®的正常培養(yǎng)基(原始培養(yǎng)條件)對細胞進行培養(yǎng),傳代3-4次。

5)可對細胞進行支原體檢測,觀察細胞狀態(tài)。

 


 

3、對于可以培養(yǎng)超過一個月的珍貴細胞株,如果需要對其進行祛除支原體的處理,可以使用德國MB公司的Mynox® Gold珍貴細胞株支原體清除試劑(貨號:10-0201/ 10-0501/ 10-1001)。

 

該試劑分為直接殺除+鞏固防護兩步處理,祛除支原體的同時,可進一步在后續(xù)培養(yǎng)中鞏固清除效果,防止支原體卷土重來"。

 

使用方法:

1)治療液與含5%FBS的培養(yǎng)及混合

2)將混合后的治療液添加至培養(yǎng)皿中

3)將接種細胞

4)培養(yǎng)細胞至80%-90%匯合后,進行傳代

5)傳代的同時加入鞏固液

重復(fù)(4)(5)兩次

6)在無Mynox® Gold的情況下傳代

7)用Venor® Gem支原體檢測試劑盒檢測



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