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hiPSC向心肌細胞分化過程中l(wèi)ncRNA的變化,支原體檢測試劑盒助力科研

更新時間:2024-07-14  |  點擊率:468

長鏈非編碼RNA (Long non-coding rna, lncRNAs)是數(shù)量最多、種類很多的一類非編碼RNA。它們定位于細胞核、細胞質(zhì)或兩個區(qū)室,并通過多種機制在多個水平上調(diào)控基因表達。LncRNAs往往比蛋白質(zhì)編碼基因進化得更快,并且具有更高的組織和發(fā)育階段特異性表達。lncRNA最初被認為是錯誤轉(zhuǎn)錄的副產(chǎn)物,沒有生物學功能,現(xiàn)在被認為參與了許多生物學過程,如免疫反應、細胞凋亡、多能性、重編程和分化。在這項研究中,我們重點研究了心臟制動lncRNA 1 (HBL1),這是一種近期報道的調(diào)節(jié)多能干細胞向心肌細胞分化過程的lncRNA。

 

 

近日,發(fā)表在《Scientifc Reports》上,標題為:“Dynamic changes in LINC00458/HBL1 lncRNA

expression during hiPSC diferentiation to cardiomyocytes"的文章中,科研人員使用RT-qPCR和高分辨率RNA FISH來監(jiān)測分化過程中HBL1的表達和定位。研究結(jié)果表明,HBL1表達在中胚層和心臟中胚層階段顯著增加,在預期的分化細胞減少之前。在細胞核和細胞質(zhì)中分別檢測到RNA的離散灶。在后一個隔間中,我們觀察到HBL1Y-box結(jié)合蛋白1 (YB-1)共定位,這可能是RNA和蛋白質(zhì)相互作用的結(jié)果,因為在RNP-IP實驗中發(fā)現(xiàn)兩者共免疫沉淀。最后,我們提供的證據(jù)表明,HBL1最初被報道為一個獨立的lncRNA基因,是LINC00458(也稱為lncRNA-ES3ES3)基因的一部分,形成一些LINC00458剪接異構(gòu)體的最后外顯子。

 

其中,科研人員將買來的內(nèi)皮祖細胞(來源于外周血)建立的人iPSC細胞系,于Essential 8™Flex培養(yǎng)基中,用重組人玻璃體連接蛋白(rhVTN-N)上進行培養(yǎng)。流式細胞術(shù)檢測細胞中Oct3/4Sox2的表達,用德國MB公司生產(chǎn)的Venor GeM qEP試劑盒檢測支原體的表達,檢測細胞的多能性水平。根據(jù)Ref.13發(fā)表的方案將hipsc分化為心肌細胞。簡單地說,用3 μM CHIR99021CDM3培養(yǎng)基中(RPMI 1640中添加500 μg/mL重組人白蛋白和213 μg/mL l -抗壞血酸2-磷酸)處理90%融合度的hiPSCs 48 h。在CDM3培養(yǎng)基中處理24 h后,用4 μM IWR-1CDM3培養(yǎng)基中處理48 h。細胞在CDM3培養(yǎng)基中培養(yǎng)48 h后,在添加B-27RPMI培養(yǎng)基中培養(yǎng)。此外,在相同的條件下,從外周血單核細胞(PBMCs)重編程的另一種hiPSC系被培養(yǎng)和分化。

 


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