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讀懂Biocoll細(xì)胞分離液主要特點(diǎn)及使用須知

更新時(shí)間:2021-01-22  |  點(diǎn)擊率:1210
   Biocoll細(xì)胞分離液是由德國(guó)Biochrom公司推出的新一代分離液。它除了可分離淋巴細(xì)胞外,更常用于胰島細(xì)胞的分離。胰島細(xì)胞的移植是一種有效的糖尿病新型療法,可解決特別是I型糖尿病患者的胰島細(xì)胞不足及功能低下的問題。
  特點(diǎn):
  1、提供多種密度的Biocoll細(xì)胞分離液,可分離外周血,骨髓和臍帶血中的單個(gè)核細(xì)胞,低密度的基質(zhì)細(xì)胞,間充質(zhì)干細(xì)胞以及嚙齒動(dòng)物的血細(xì)胞等。
  2、生產(chǎn)過程符合GMP以及美國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn),無菌即用,內(nèi)毒素含量低。
  3、分離效果好,所得細(xì)胞活性>80%,Ficoll可高壓滅菌,有效期長(zhǎng)。
  應(yīng)注意如下事項(xiàng)
  分離方法會(huì)影響胰島的產(chǎn)率和存活率,因此,取材時(shí)需要注意
  1.胰臟應(yīng)快速取材,保持包膜完整。
  2.建議采用UW溶液運(yùn)輸。
  3.對(duì)胰臟進(jìn)行評(píng)估,在消化酶灌注前去除多余的脂肪和殘留的十二指腸和脾臟。
  4.消化過程不宜進(jìn)行震蕩,以保證胰腺組織被灌注的消化酶液消化,而不是被胰腺所釋放的胰蛋白酶消化。
  5.要保證胰島的包膜完整,消化不能太充分。寧可不足,也不可過頭,否則會(huì)影響胰島純化的產(chǎn)率。
  1.分別將7mL和10mL
  Biocoll細(xì)胞分離液(D=1.077g/mL,20℃)放入15mL和25mL的離心管中。
  2.將肝素化抗凝全血(50U/mL肝素,無穩(wěn)定劑)與等體積培養(yǎng)基混合均勻,小心添加在分離液的液面上。
  3.1200g離心20min。用巴斯德吸管吸?。?0-100%)淋巴細(xì)胞富集層(位于血漿和Biocoll之間),加入培養(yǎng)基中洗2次,*300g離心10min.*200g離心10min,即得所需淋巴細(xì)胞,可以按常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)等實(shí)驗(yàn)。
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